很多ELISA實(shí)驗新手客戶(hù)都會(huì )咨詢(xún)我司技術(shù)能否把全血提取出來(lái)放-70℃條件保存,等實(shí)驗開(kāi)展了(比如一個(gè)月左右的時(shí)間)再離心全血取血清或者血漿做ELISA實(shí)驗?這種做法我司技術(shù)都是持反對建議的。與此同時(shí),也是明確要求我司銷(xiāo)售人員在與客戶(hù)售前溝通時(shí)建議老師全血樣本提取好了應該及時(shí)離心出血清或者血漿。并要求-70℃條件下保存,如果一個(gè)月左右可以開(kāi)展實(shí)驗可以-20℃保存,期間不能反復凍融。至于凍存后的全血不可以再提取血清、血漿樣本來(lái)做elisa的具體原因如下:
1.全血凍存后解凍,用常規離心方式提取血清仍然是可以的,不利的一點(diǎn)是,伴隨凍融的過(guò)程,會(huì )出現比較嚴重的溶血事件。而后提取出來(lái)的血清能否做elisa,主要取決于溶血程度、你所要檢測的目標蛋白的性質(zhì)及你實(shí)驗的目的。
2.溶血釋放的胞內組分往往容易影響本底,甚至出現假陽(yáng)性;而蛋白酶的釋放可能導致目的蛋白的降解影響結果;目的蛋白的大小、穩定性、特異性(相對抗體而言)又影響其自身與酶標板的吸附、自身降解、自身與抗體的結合率等等。以上各種不確定性因素存在下,如果你只是對血清中某種血清蛋白做定性檢測的話(huà),做elisa應該問(wèn)題不大;若是定量分析的話(huà),從可靠性的角度上看,不建議該做法。