1.剖析實(shí)驗使用的類(lèi)型 

一般抗體闡明書(shū)都列出該抗體經(jīng)實(shí)驗驗證過(guò)適用于何種剖析類(lèi)型，假如抗體闡明書(shū)沒(méi)有提及的使用類(lèi)型，并不意味著(zhù)該抗體不適用于此種剖析使用類(lèi)型，而僅是闡明尚未經(jīng)過(guò)此種剖析實(shí)驗驗證，假如抗體不適用某些剖析實(shí)驗，則會(huì )在抗體闡明書(shū)上標注出來(lái)不適于某剖析實(shí)驗。

2.樣本的物種

應挑選物種相同或有穿插反響的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有穿插反響，因其氨基酸序列同源性較高，假如樣本的種類(lèi)未列入抗體闡明書(shū)上的穿插反響種屬表中，并不意味著(zhù)該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而僅僅表明該物種尚未用此抗體檢測驗證過(guò)，應經(jīng)過(guò)序列比對的辦法來(lái)猜測穿插反響，可使用Expasy 和 NCBI BLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對。

3.樣本蛋白的結構性質(zhì) 

了解樣本蛋白的結構性質(zhì)有助于挑選*適宜的抗體，至少兩方面因素需求考慮:

1）.待測樣本蛋白的結構域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其中的免疫原包含：全長(cháng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體闡明書(shū)一般都有免疫原的描繪，假如打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(cháng)的某一區域，則必須挑選用含此片段域的免疫原制備出的抗體。

2）.樣本的提取或處理進(jìn)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結構阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識別天然折疊狀態(tài)的蛋白。

4.一抗宿主物種的挑選 

一般說(shuō)來(lái)，在使用偶聯(lián)二抗結合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種挑選較為重要，關(guān)于免疫組化而言，盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內源性免疫球蛋白發(fā)生穿插反響

5.二抗的挑選

二抗應選用與使用的一抗相同的物種來(lái)歷，主張檢查二抗闡明書(shū)保證該抗體適用于你的檢測使用， 二抗一般連接熒光素FITC或發(fā)光團。

6.兩層染色抗體的挑選

用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細胞培養物或安排切片的兩層免疫染色要求一抗來(lái)歷于不同物種而且二抗別離識別其中，二抗闡明書(shū)應描繪其與其它物種來(lái)歷的免疫球蛋有否有穿插吸附。

7.熒光和化學(xué)發(fā)光符號 

連接于二抗的符號物是為了檢測抗體的結合，挑選符號物依賴(lài)于幾個(gè)參數：