1、血清

A、DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復合物構成時(shí)不能含血清，由于血清會(huì )影響復合物的構成。

B、一般細胞對無(wú)血清培養能夠耐受幾個(gè)小時(shí)沒(méi)問(wèn)題，轉染用的培養液能夠含血清也能夠不加，但血清一度曾被以為會(huì )降低轉染效率，轉染培養基中參加血清需求對條件進(jìn)行優(yōu)化。

C、關(guān)于對血清缺乏比較敏感的細胞，能夠運用養分豐厚的無(wú)血清培養基，或許在轉染培養基中運用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議運用轉染試劑。有條件的話(huà)，能夠用無(wú)血清培養基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時(shí)分要輕，靠邊際緩緩參加液體，然后不要吹吸細胞，而是滾動(dòng)培養板讓液體滾動(dòng)在細胞表面。假如洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會(huì )增多。

2、抗生素(PS)

抗生素，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些抗生素一般關(guān)于真核細胞無(wú)毒，但陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素能夠進(jìn)入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能運用抗生素，甚至在預備轉染前進(jìn)行細胞鋪板時(shí)也要防止運用抗生素。這樣，在轉染前也不用潤洗細胞。關(guān)于穩定轉染，不要在選擇性培養基中運用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外，為了保證無(wú)血清培養基中細胞的健康成長(cháng)，運用比含血清培養基更少的抗生素量。

3、細胞狀況

這點(diǎn)非常重要，不要急于求成，必定要讓細胞處于jia的成長(cháng)狀況再做。有文獻說(shuō)傳代不要超越17代。細胞復蘇后的3代左右時(shí)細胞狀況hao，不要用傳了許多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會(huì )發(fā)生改變。大多數已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養包含了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養在試驗室中保存數月和數年后會(huì )經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控改變等而演化。這會(huì )導致和轉染相關(guān)的細胞行為的改變。假如隨時(shí)刻發(fā)現這種改變，消融一管新鮮的細胞可能會(huì )恢復原先的轉染活性。

4、細胞鋪板密度

用于轉染的jia細胞密度根據不同的細胞類(lèi)型或使用而異。因轉染試劑對細胞有毒害效果，細胞太少，容易死。一般轉染時(shí)，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml，確保轉染時(shí)細胞沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)或處于靜止期。由于轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同試驗間堅持一個(gè)根本的傳代步驟很重要。

5.啟動(dòng)子的選擇

取得高轉染活性所需選擇的啟動(dòng)子依賴(lài)于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動(dòng)子在大多數細胞類(lèi)型中能夠取得高表達活性。同其他啟動(dòng)子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤病毒)相比，在BHK-21中其活性高。這三種病毒啟動(dòng)子在T細胞來(lái)歷的細胞系，如Jurkat中組成表達水平較低。

6、DNA量

高質(zhì)量的DNA關(guān)于進(jìn)行的轉染至關(guān)重要。轉染的質(zhì)粒必定純度好、濃度高、無(wú)內毒素。濃度不要低于0.35ug/ul。產(chǎn)物表達，48小時(shí)mRNA表達gao；72h蛋白表達gao。