細胞培養基的基本要求:
體外培養的細胞直接生活在培養基中,因此培養基應能滿(mǎn)足細胞對營(yíng)養成分、促生長(cháng)因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求。
一、營(yíng)養成分維持細胞生長(cháng)的營(yíng)養條件一般包括以下幾個(gè)方面:
1、氨基酸:是細胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸:亮、異亮、蘇、賴(lài)、色、苯丙、蛋、組、酪。它在細胞代謝過(guò)程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來(lái)源,同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì)。 體外培養的各種培養基內都含有必需氨基酸。
2、單糖:培養中的細胞可以進(jìn)行有氧與無(wú)氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力最高。
體外培養動(dòng)物細胞時(shí),幾乎所有的培養基或培養液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。
3、無(wú)機離子與微量元素:細胞生長(cháng)除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。
4、維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養基常有的成分。
細胞培養的優(yōu)點(diǎn):
1. 研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
2. 研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
3. 研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
4. 研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備
記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5. 研究的范圍比較廣泛
應用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等;適用的對象范圍廣,從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物,一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織,都可進(jìn)行有針對性的研究。