ELISA結果如何判斷？

ELISA試驗結果的判斷主要根據所做實(shí)驗的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,現一般按S/CO進(jìn)行判斷,其中S為樣品吸光度,CO為K*陰性對照,K值依據所做實(shí)驗有所不同。如果沒(méi)有光度計(酶標儀)靠肉眼判斷,則陰、陽(yáng)性判斷主要靠經(jīng)驗。ELISA常用結果判定方法如下：

1.  定性測定

定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無(wú)反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來(lái)表示反應的強度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗，呈陽(yáng)性反應的最高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀(guān)察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。

2. 間接法和夾心法

這類(lèi)反應的定性結果可以用肉眼判斷。目視標本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色清晰者為陽(yáng)性。但在ELSIA中，正常人血清反應后?？沙霈F呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗的條件不同而異，因此實(shí)驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類(lèi)似物（見(jiàn)3.6）。在用肉眼判斷結果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽(yáng)性的指標。目視法簡(jiǎn)捷明了，但頗具主觀(guān)性。在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這樣可以得到客觀(guān)的數據。先讀出標本（sample，S）、陽(yáng)性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進(jìn)行計算。計算方法有多種，大致可分為陽(yáng)性判定值法和標本與陰性對照比值法兩類(lèi)。

3. 用此法判斷結果要求實(shí)驗條件十分恒定，試劑的制備必須標準化，陽(yáng)性和陰性的對照品應符合一定的規格，須配用精密的儀器，并嚴格按規定操作。陽(yáng)性判定值公式中的常數是在這特定的系統中通過(guò)對大量標本的實(shí)驗檢測而得到的?，F舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血漿，陽(yáng)性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml.每次試驗設2個(gè)陽(yáng)性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均數（NCX）和陽(yáng)性對照A值的平均數（PCX），兩個(gè)平均數的差（P-N）必須大于一個(gè)特定的數值（例0.400），試驗才有效。3個(gè)陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對照重新計算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗無(wú)效。陽(yáng)性判定值按下式計算： 陽(yáng)性判定值=NCX+0.05 標本A值＞陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。根據以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽(yáng)性對照也起到試驗的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當均會(huì )產(chǎn)生"試驗無(wú)效"的后果。

4. 在實(shí)驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，計算S/N值。也有寫(xiě)作P/N的，這里的P不代表陽(yáng)性(positive)，而是病人（patient）的縮寫(xiě)，不應誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽(yáng)性標準，現多為各種測定所沿用。實(shí)際上每一測定系統應該用實(shí)驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類(lèi)試劑盒規，如N<0.05（或其他數值），則按0.05計算，否則將出現假陽(yáng)性結果。