人視網(wǎng)膜上皮細胞（ARPE-19）

人視網(wǎng)膜上皮細胞(ARPE-19)
細胞介紹：
該細胞系源自于一名19歲車(chē)禍罹難的健康男性的視網(wǎng)膜組織，由Amy Aotaki-Keen建系于1986年。該細胞系表達視網(wǎng)膜色素細胞*的分子標記如胞 內視黃醛結合蛋白和PRE-65。
 
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
1.準備 DMEM/F12 培養基(DMEM/F12，GIBCO);北美胎牛血清，10%;雙抗1%。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
 
人視網(wǎng)膜上皮細胞(ARPE-19)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止 消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液 氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
 
細胞特性：
1)來(lái)源：視網(wǎng)膜
2)形態(tài)：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
人視網(wǎng)膜上皮細胞(ARPE-19)運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細 胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。