人永生化表皮細胞（HaCat）

人永生化表皮細胞(HaCat)
細胞介紹
該細胞源自一位 62 歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽(yáng)性。
 
細胞特性
1.  來(lái)源：正常表皮細胞
2.  形態(tài) ：上皮細胞樣，貼壁生長(cháng)
3.  含量：>1x10 6 個(gè)/mL
4.  污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5.  規格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
 
運輸和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在 1000RPM，常溫條件下，離心 5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm 培養皿或者 T25 培養瓶中培養，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
 
人永生化表皮細胞(HaCat)細胞用途：僅供使用。
細胞培養步驟
一． 培養基 及 培養 凍存 條件準備：
1）準備 DMEM 培養基(DMEM，GIBCO)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO)，15%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為 70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
二． 細胞 處理 ：
1） 復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約 1ml 含血清的培養基后加入凍存管中，再添加 10%DMSO 后進(jìn)行凍存。
 
人永生化表皮細胞(HaCat)注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。