雞淋巴瘤細胞（DT40）

雞淋巴瘤細胞(DT40)
細胞介紹
DT40是來(lái)自HylineSC雞法氏囊淋巴細胞株經(jīng)鳥(niǎo)類(lèi)白血病病毒誘導建株的。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒l(RAV-l)感染出生1天的小雞得到。法氏囊中的腫瘤制成細胞懸液后通過(guò)靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經(jīng)過(guò)一次體內移植后，建立了 DT40細胞株。這株細胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表達的c-myc RNA水平較高。它缺少一個(gè)正常c-myc基因，但含有兩個(gè)拷貝ALV去調控的myc基因。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。在IgL位點(diǎn)，DT40包含一個(gè)重排和一個(gè)胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細胞株中都能誘導組織相容性(MHC)II類(lèi)抗原表達。v-rel誘導的MHCII表達比c-rel誘導快，且其有效性在數周后達到crel的50倍。這株細胞呈淋巴母細胞表型。傳染性檢測表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1。這株細胞可以用于穩轉研究。
 
細胞特性
1)來(lái)源：雞淋巴瘤
2)形態(tài)：淋巴母細胞
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至l〇cm培養或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
 
雞淋巴瘤細胞(DT40)細胞用途：僅供使用。
細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
1. 準備 DMEM 培養基(DMEM，GIBCO)，85%;胎牛血清，10%，雞血清，5%。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
 
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。懸浮細胞凍存時(shí)，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走)，入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
 
雞淋巴瘤細胞(DT40)注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。