人ruxian癌阿霉素耐藥細胞（MCF-7/Adr

人ruxian癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)
細胞培養步驟：
1)培養基及培養凍存條件準備：
注意：培養瓶里面的培養液是不含藥物的，待細胞長(cháng)到70-80%匯合度時(shí)，去掉培養液，加含500ng/ml阿霉素藥物的培養液，放入培養箱，這段時(shí)間會(huì )有少部分細胞懸浮起來(lái)，屬于正常情況，通過(guò)換液可以去掉，等細胞長(cháng)滿(mǎn)就可以消化 傳代了，這時(shí)可以一直用含藥物培養基來(lái)培養細胞，兩代之后就可以將藥物濃 度提髙到l〇〇〇ng/ml，細胞凍存時(shí)不要在培養基中加藥物。

1.準備 RPIVM-1640 培養基(RPMI-1640:GIBCO);北美胎牛血清 (United States, GIBCO)，

10%;雙抗 1%，添加 2mML-GUJ，添加 luM Adr。
2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢 查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

 
3.細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 
人ruxian癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細胞特性：
1)來(lái)源：ruxian癌
2)形態(tài)：上皮細胞樣貼壁生長(cháng)
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人ruxian癌阿霉素耐藥細胞(MCF-7/Adr)運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞

，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。