一、細胞生長(cháng)緩慢

營(yíng)養物質(zhì)不足

培養基中的營(yíng)養成分是細胞生長(cháng)的關(guān)鍵。如果培養基的配方不適合細胞類(lèi)型，或者培養時(shí)間過(guò)長(cháng)導致?tīng)I養成分耗盡，細胞生長(cháng)就會(huì )受到抑制。例如，對于快速增殖的腫瘤細胞系，基礎培養基可能需要添加額外的生長(cháng)因子和氨基酸才能滿(mǎn)足其生長(cháng)需求。

培養環(huán)境不佳

溫度對細胞生長(cháng)影響顯著(zhù)。大多數哺乳動(dòng)物細胞的適宜生長(cháng)溫度是 37℃左右。如果培養箱溫度不準確，過(guò)高或過(guò)低都會(huì )影響細胞的新陳代謝，導致生長(cháng)緩慢。例如，溫度低于 37℃時(shí)，酶的活性降低，細胞的生化反應速度變慢。

氣體環(huán)境也很重要。細胞培養一般需要 5% 的二氧化碳來(lái)維持培養基的 pH 值在 7.2 - 7.4 之間。如果二氧化碳濃度不準確，pH 值發(fā)生改變，會(huì )影響細胞的生長(cháng)。另外，培養箱中的氧氣濃度對于某些對氧敏感的細胞也很關(guān)鍵，過(guò)高或過(guò)低的氧氣含量可能會(huì )使細胞產(chǎn)生氧化應激，從而減緩生長(cháng)。

細胞污染

微生物污染是導致細胞生長(cháng)緩慢的常見(jiàn)原因之一。細菌、真菌和支原體污染都可能影響細胞生長(cháng)。細菌和真菌污染通常比較容易發(fā)現，因為它們會(huì )使培養基變渾濁，產(chǎn)生異味。而支原體污染比較隱匿，它會(huì )爭奪細胞的營(yíng)養物質(zhì)，改變細胞的代謝環(huán)境，還可能干擾細胞的基因表達，從而抑制細胞生長(cháng)。

細胞接種密度過(guò)低

細胞之間存在著(zhù)相互作用，合適的接種密度可以提供細胞間的信號傳導，促進(jìn)細胞生長(cháng)。如果接種密度過(guò)低，細胞可能會(huì )進(jìn)入一種靜止或緩慢生長(cháng)的狀態(tài)，因為細胞分泌的一些生長(cháng)促進(jìn)因子在低密度情況下難以達到有效濃度。例如，神經(jīng)干細胞在低密度接種時(shí)，由于缺乏足夠的細胞間相互作用，可能無(wú)法正常分化和增殖。

二、細胞不貼壁

培養器皿處理不當

用于細胞培養的器皿表面通常需要經(jīng)過(guò)特殊處理，如用多聚賴(lài)氨酸、膠原蛋白等進(jìn)行包被，以促進(jìn)細胞貼壁。如果器皿沒(méi)有經(jīng)過(guò)適當的包被處理，或者包被的物質(zhì)質(zhì)量不佳、濃度不合適，細胞就難以貼壁。例如，在培養上皮細胞時(shí)，合適濃度的膠原蛋白包被可以模擬體內細胞外基質(zhì)的環(huán)境，有利于細胞貼壁生長(cháng)；如果膠原蛋白濃度過(guò)低，細胞貼壁能力就會(huì )減弱。

培養基成分不合適

某些細胞的貼壁需要特定的培養基成分。例如，一些細胞需要血清中的貼壁因子來(lái)幫助它們附著(zhù)在培養器皿表面。如果使用了無(wú)血清培養基，而沒(méi)有添加足夠的貼壁因子替代品，細胞可能不會(huì )貼壁。另外，培養基的滲透壓也會(huì )影響細胞貼壁，過(guò)高或過(guò)低的滲透壓可能導致細胞形態(tài)改變，從而影響貼壁。